气相色谱法在食品检测中的应用 经氢氧化钾甲醇液甲酯化

气相色谱法广泛应用于食品中脂肪酸、气相农药残留、色谱毒害物质、法食香精香料、品检食品添加剂、测中食品包装材料中的气相挥发物等成分的分析中。

一、色谱食品中脂肪酸含量的法食测定

(一)分析原理

样品中脂肪酸一般以甘油三酯形式存在，经氢氧化钾甲醇液甲酯化，品检生成相应的测中脂肪酸甲酯，经气相色谱分离并定量测定。气相

(二)仪器与试剂

(1)仪器：Sigma 300气相色谱仪，色谱LCI-100积分仪，法食SQF-200B型氢气发生器。品检

(2)试剂：AOCS混合油对照品RM₃SuPelcs 50mg、测中RM₆SuPelcs 50mg(MATREYA公司提供)；棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸均为气相色谱标准；乙醚、正己烷、甲醇、氢氧化钾均为分析纯。

(三)测定方法

(1)色谱条件：色谱柱：2.1m×2mm不锈钢柱，填充15％CP-SIL 84白色高效担体100-120目。载气：N₂。空气：30kPa。氢气：20kPa。检测器：FID。进样口温度：240^°C。检测器温度：220^°C。程序升温：175℃、180^°C、210^°C保持时间分别为7.0min、8.0min、5.0min。升温速度：30^°C/min。

(2)回归曲线制作：精密吸取AOCS混合油对照品RM₃ SuPelcs、RM₆ SuPelcs，用乙醚-正己烷(2:1)溶解并稀释至适当浓度，定体积进样，制作标准曲线。

(3)样品制备：取油样100mg(其他样品称样适当增加)，置10mL容量瓶中，加入乙醚-正己烷(2:1)lmL、甲醇1mL及0.8mol/L氢氧化钾甲醇溶液1mL，摇匀，静置5min，加水至刻度，取上层液进样。

(四)结果计算

以保留时间定性鉴定各种脂肪酸，以峰面积查标准曲线并计算出各种脂肪酸的含量，以上数据由积分仪或计算机处理。

二、食品中有机氯农药残留量的测定

(一)分析原理

样品中的有机氯农药经提取、净化与浓缩后，进样汽化并由氮气载入色谱柱中进行分离，再进入对电负性强的组分具有较高检测灵敏度的电子捕获检测器中检出，与标准有机氯农药比较定量。

(二)仪器及试剂

(1)仪器

色谱条件：检测器为氖源电子捕获检测器。色谱柱：玻璃柱，长2m，内径3～4mm，内涂以1.5％OV-17和2％QF-1混合固定液的80—100目白色硅藻土担体(或Chromosorb W)。温度：进样器190⁰C，柱温160℃，检测器165℃。载气流速：60mL/min。

(2)试剂

六六六、滴滴涕标准溶液：准确称取α-666、β-666、γ-666、δ-666、p，p’-DDT；|p，p’-DDD、p，p’-DDE、0，p’-DDT各10.0mg，溶于苯，分别移入100mL容量瓶中，加苯至刻度，混匀，每1mL含农药100.0μg，作为储备液存于冰箱中。将上述标准储备液以己烷稀释至O.01μg／mL作为六六六、滴滴涕标准溶液。

(三)测定方法

1、提取

(1)粮食：称取20g粉碎并通过20目筛的样品，置于250mL具塞锥形瓶中，加100mL石油醚，于电动振荡器上振荡30min，滤入150mL分液漏斗中，以20—30mL石油醚分数次洗涤残渣，洗液并入分液漏斗中，以石油醚稀释至100mL。

(2)蔬菜、水果：称取200g样品置于捣碎机中捣碎1～2min(若样品含水分少，可加一定量的水)，称取相当于原样50g的匀浆，加100mL丙酮，振荡1min，浸泡lh，过滤。残渣用丙酮洗涤三次，每次10mL，洗液并入滤液中，置于500mL分液漏斗中，加80mL石油醚，振摇1min，加200mL2％硫酸钠溶液，振摇1min，静置分层，弃去下层，将上层石油醚经盛有15g无水硫酸钠的漏斗，滤入另一分液漏斗中，再以石油醚少量数次洗涤漏斗及其内容物，洗液并入滤液中，并以石油醚稀释至100mL。

(3)乳与乳制品：称取100g鲜乳(乳制品取样量按鲜乳折算)，移入500mL分液漏斗中，加100mL乙醇，1g草酸钾剧烈振摇1min，加100mL乙醚，摇匀，加100mL石油醚，剧烈振摇2min，静置10min，弃去下层。将有机溶剂层经盛有20g无水硫酸钠的漏斗，小心缓慢地滤入250mL锥形瓶中，再用石油醚少量多次洗涤漏斗及其内容物，洗液并入滤液中。以脂肪提取器或K-D浓缩器蒸除有机溶剂，残渣为黄色透明油状物。再以石油醚溶解，移入150mL分液漏斗中，以石油醚稀释至100mL。

(4)各种肉类及其他动物组织：称取绞碎均匀的20g样品置于乳钵中，加约80g无水硫酸钠研磨，无水硫酸钠用量以样品研磨后呈干粉状为度，将研磨后的样品和硫酸钠一并移入250mL具塞锥形瓶中，加100mL石油醚，于电动振荡器上振荡30min，抽滤，残渣用约100mL石油醚分数次洗涤，洗液并入滤液中，将全部滤液用脂肪抽提器或K-D浓缩器蒸除石油醚，残渣为油状物。以石油醚溶解残渣，移入150mL分液漏斗中，加石油醚稀释至100mL。

2、净化

(1)于100mL样品石油醚提取液(富含脂肪的动、植物样品除外)中加10mL硫酸，振摇数下后，倒置分液漏斗、打开活塞放气，然后振摇0.5min，静置分层，弃去下层溶液，上层溶液由分液漏斗上口倒入另一个250mL分液漏斗中，用少许石油醚洗涤原分液漏斗后，并入250mL分液漏斗中，加100mL2％硫酸钠溶液，振摇后静置分层，弃去下层水溶液，用滤纸吸除分液漏斗颈内外的水，然后将石油醚经盛有约15g无水硫酸钠的漏斗过滤，并以石油醚洗涤盛有无水硫酸钠的漏斗数次，洗液并入滤液中，并以石油醚稀释至100mL。

(2)于25mL富含脂肪的动、植物油样品的石油醚提取液中加25mL硫酸，振摇数下后，倒置分液漏斗，打开活塞放气，再振摇0.5min，静置分层，弃去下层溶液，上层溶液由分液漏斗上口倒于另一500mL分液漏斗中，用少许石油醚洗涤原分液漏斗，洗液并入分液漏斗中，加250m12％硫酸钠溶液，摇匀，静置分层，以下按(1)自“弃去下层水溶液”起依法操作。

3、浓缩

将分液漏斗中已净化的石油醚溶液经过盛有15g无水Na₂SO₄的小漏斗，缓慢滤入K-D浓缩器中，并以少量石油醚洗盛有无水Na₂S0₄的漏斗3～5次，合并洗液与滤液，然后于水浴上将滤液用K-D浓缩器浓缩至约O.3mL(不要蒸干，否则结果偏低)，停止蒸馏浓缩，用少许石油醚淋洗导管尖端，最后定容至0.5～1.0mL，摇匀，塞紧，供测定用。

4、测定

(1)标准晦线的绘制：吸取BHC与DDT标准混合溶液l，2，3，4，5μL分别进样，根据各农药组分含量(ng)与其相对应的峰面积(或峰高)，绘制各农药组分的标准曲线。

(2)样品测定吸取样品处理液1.0～5.0μL进样，记录色谱峰，据其峰面积(或峰高)于六六六与滴滴涕各异构体的标准曲线上查出相应的组分含量(ng)。

(四)定性定量分析

根据标准六六六与滴滴涕的各个异构体的保留时问进行定性。六六六与滴滴涕的各个异构体出峰顺序为：α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-六六六，p，p’一DDE，o，p’-DDT，p，p’-DDD，p，p’-DDT。

从标准曲线上查出相应含量；计算样品中BHT、DDT的不同异构体或衍生物的单一含量，最后，将六六六、滴滴涕的不同异构体或衍生物单一含量相加，即得出样品有机氯农药六六六、滴滴涕的总量。

参考资料：现代食品检测技术

相关链接：气相色谱仪，六六六，滴滴涕

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